কোষ বিভাজন এবং ডিএনএ/আরএনএ নিষ্কাশনের জন্য আল্ট্রাসাউন্ড কিভাবে ব্যবহার করা যায়?

কীভাবে সেল বিঘ্ন এবং ডিএনএ/আরএনএ নিষ্কাশন？ এর জন্য আল্ট্রাসাউন্ড ব্যবহার করবেন？

আল্ট্রাসাউন্ড হ'ল সেল বিঘ্ন এবং নিউক্লিক অ্যাসিড (ডিএনএ/আরএনএ) নিষ্কাশনে একটি দক্ষ এবং সাধারণভাবে ব্যবহৃত প্রযুক্তি। এর মূল নীতিটি হ'ল কোষের কাঠামো ধ্বংস করতে এবং অভ্যন্তরীণ পদার্থগুলি প্রকাশ করতে ক্যাভিটেশন প্রভাব এবং যান্ত্রিক কম্পন ব্যবহার করা। নিম্নলিখিত নির্দিষ্ট প্রক্রিয়া, আবেদন প্রক্রিয়া এবং মূল সতর্কতা থেকে একটি ব্যাখ্যা দেওয়া হয়েছে:

I. কোষ বিঘ্নের জন্য আল্ট্রাসাউন্ডের নীতি এবং প্রক্রিয়া
কোষের ব্যাঘাতের মূলটি হ'ল কোষের ঝিল্লি (প্রাণী কোষ) বা কোষের প্রাচীর + কোষের ঝিল্লি (উদ্ভিদ, ব্যাকটিরিয়া, ছত্রাক ইত্যাদি) অন্তঃকোষীয় পদার্থ (যেমন নিউক্লিক অ্যাসিড, প্রোটিন, অর্গানেলস ইত্যাদি) প্রকাশ করার জন্য ধ্বংস করা। আল্ট্রাসাউন্ড নিম্নলিখিত প্রক্রিয়াগুলির মাধ্যমে এই প্রক্রিয়াটি অর্জন করে:
1। মূল নীতি: গহ্বর প্রভাব
আল্ট্রাসাউন্ড একটি উচ্চ-ফ্রিকোয়েন্সি যান্ত্রিক তরঙ্গ যা 20kHz এর চেয়ে বেশি ফ্রিকোয়েন্সি সহ। যখন অতিস্বনক প্রোব (অতিস্বনক বিঘ্নকারীদের পরিবর্ধক) কোষযুক্ত তরল নমুনায় serted োকানো হয়, তখন উচ্চ-ফ্রিকোয়েন্সি কম্পন (সাধারণত 15-50kHz) উত্পন্ন হয়, যা তরল মাধ্যমের মধ্যে গহ্বরকে ট্রিগার করে:

 উচ্চ-ফ্রিকোয়েন্সি কম্পনের ফলে তরলটিতে প্রচুর সংখ্যক ক্ষুদ্র বুদবুদ (ক্যাভিটেশন বুদবুদ) তৈরি হয়। এই বুদবুদগুলি চাপ পরিবর্তনের অধীনে দ্রুত প্রসারিত এবং সংকুচিত হয় এবং অবশেষে হিংস্রভাবে ফেটে যায় (ধসে)।
 যখন বুদবুদ ফেটে যায়, বিশাল তাত্ক্ষণিক শক্তি (স্থানীয় উচ্চ তাপমাত্রা, উচ্চ চাপ এবং শক্তিশালী শক তরঙ্গ) প্রকাশিত হবে এবং উত্পন্ন প্রভাব শক্তিটি কোষের খণ্ডন অর্জনের জন্য সরাসরি কোষের ঝিল্লি কাঠামো (কোষের ঝিল্লি, কোষের প্রাচীর) ছিঁড়ে ফেলবে।
2। সহায়ক প্রভাব: যান্ত্রিক কম্পন এবং শিয়ার ফোর্স
আল্ট্রাসাউন্ডের উচ্চ-ফ্রিকোয়েন্সি যান্ত্রিক কম্পনটি কোষগুলিতে সরাসরি শিয়ার ফোর্স এবং ঘর্ষণ শক্তি তৈরি করবে, কোষের কাঠামো ধ্বংস করতে আরও সহায়তা করবে, বিশেষত ঘন কোষের দেয়াল (যেমন ছত্রাক এবং উদ্ভিদ কোষ) কোষগুলির জন্য।
3। খণ্ডন প্রক্রিয়া (উদাহরণ হিসাবে পরীক্ষামূলক অপারেশন গ্রহণ করা)
Cell সেল সাসপেনশনকে চিকিত্সা করার জন্য (যেমন ব্যাকটিরিয়া সংস্কৃতি তরল, টিস্যু হোমোজেনেট ইত্যাদি) সেন্ট্রিফিউজ টিউব বা বেকার হিসাবে চিহ্নিত করা, আল্ট্রাসোনিক প্রোব (হর্ন) sert োকান, এবং তদন্তটি তরলটিতে নিমজ্জিত করা দরকার তবে ধারক প্রাচীরের সংস্পর্শে নয়।

আল্ট্রাসোনিক উপকরণ এবং সেট পরামিতিগুলির উপর নির্ভর করুন (শক্তি, সময়, ইত্যাদি): উচ্চ-ফ্রিকোয়েন্সি কম্পন তরলটিতে গহ্বরের বুদবুদ তৈরি করে এবং বুদবুদ ফেটে উত্পন্ন প্রভাব শক্তি সরাসরি কোষের কাঠামো ধ্বংস করে এবং ইনট্রা সেলুলার পদার্থগুলি প্রকাশ করে (নিউক্লিক অ্যাসিড, প্রোটিন, মেটাবোলিটস ইত্যাদি)।
2। ডিএনএ/আরএনএ নিষ্কাশনে আল্ট্রাসাউন্ডের নির্দিষ্ট প্রয়োগ
ডিএনএ/আরএনএ নিষ্কাশনের মূল পদক্ষেপগুলির মধ্যে রয়েছে: নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি প্রকাশের জন্য কোষের ব্যাঘাত → অমেধ্যগুলি অপসারণ (প্রোটিন, লিপিডস, পলিস্যাকারাইডস, ইত্যাদি) n নিউক্লিক অ্যাসিডের পরিশোধন। আল্ট্রাসাউন্ডের ভূমিকাটি মূলত প্রথম ধাপে কেন্দ্রীভূত হয় - দক্ষ কোষের ব্যাঘাত এবং নিউক্লিক অ্যাসিড রিলিজ। নির্দিষ্ট প্রয়োগের পরিস্থিতি এবং সুবিধাগুলি নিম্নরূপ:
1। উপযুক্ত নমুনা প্রকার
আল্ট্রাসাউন্ড বিভিন্ন নমুনার নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের জন্য উপযুক্ত, সহ:

 অ্যানিমাল টিস্যু (যেমন লিভার, পেশী): প্রথমে ছোট ছোট টুকরো টুকরো করা দরকার, আল্ট্রাসাউন্ড দ্রুত কোষগুলিকে ব্যাহত করতে এবং নিউক্লিক অ্যাসিডগুলি ছেড়ে দিতে পারে;
 ব্যাকটিরিয়া/ছত্রাক: কোষের দেয়ালগুলি তুলনামূলকভাবে শক্ত, traditional তিহ্যবাহী পদ্ধতিগুলি (যেমন লাইসোজাইম চিকিত্সা) অদক্ষ, এবং আল্ট্রাসাউন্ড শক্তিশালী গহ্বরের প্রভাবের মাধ্যমে কোষের দেয়ালগুলি ধ্বংস করতে পারে;
Clected সংস্কৃতিযুক্ত কোষ (অনুগত বা স্থগিত কোষ): সরাসরি স্থগিতাদেশ এবং তারপরে আল্ট্রাসাউন্ড, কোনও জটিল প্রিট্রেটমেন্টের প্রয়োজন হয় না;
 প্ল্যান্ট টিস্যু: সেলুলোজ এবং পেকটিন রয়েছে, আল্ট্রাসাউন্ড কোষের দেয়াল ভাঙতে এবং কোষের সামগ্রীগুলি প্রকাশে সহায়তা করতে পারে।
2। অপারেশনে মূল পরামিতি (নিউক্লিক অ্যাসিডের গুণমানকে প্রভাবিত করে)
অতিস্বনক চিকিত্সার নিউক্লিক অ্যাসিড অবক্ষয় বা অতিরিক্ত খণ্ডন এড়াতে প্যারামিটারগুলির কঠোর নিয়ন্ত্রণ প্রয়োজন (পিসিআর, সিকোয়েন্সিং ইত্যাদি) পরবর্তী পরীক্ষাগুলিকে প্রভাবিত করে):

 শক্তি: সাধারণত 50-300W (নমুনা প্রকার অনুসারে সামঞ্জস্য করা হয়, যেমন ব্যাকটিরিয়া উচ্চতর শক্তি প্রয়োজন)। খুব উচ্চ শক্তি নিউক্লিক অ্যাসিড শিয়ারিং খুব সংক্ষিপ্ত হতে পারে এবং খুব কম শক্তি অপ্রতুল খণ্ডন ঘটায়।
 ওয়ার্কিং/ইন্টারভাল সময়: নিউক্লিক অ্যাসিড ডেন্যাটরেশন (ডিএনএ/আরএনএ সহজেই উচ্চ তাপমাত্রায় সহজেই হ্রাস পায়) এড়াতে অবিচ্ছিন্ন অতিস্বনক তাপ উত্পাদন এড়াতে "পালস" চিকিত্সা (যেমন 30 সেকেন্ড + ইন্টারমিশন 30 সেকেন্ডে কাজ করা) ব্যবহার করুন।
 টোটাল চিকিত্সার সময়: নমুনার উপর নির্ভর করে (যেমন প্রাণী কোষের জন্য 1-3 মিনিট এবং ব্যাকটেরিয়ার জন্য 3-5 মিনিট)। অতিরিক্ত চিকিত্সা নিউক্লিক অ্যাসিড বিভাজনকে আরও বাড়িয়ে তুলবে।
 টেম্পেরেচার কন্ট্রোল: পুরো প্রক্রিয়া জুড়ে বরফ স্নান (নমুনাগুলি বরফের উপরে স্থাপন করা হয়), কারণ অতিস্বনক প্রক্রিয়া তাপ উত্পন্ন করবে (স্থানীয় উচ্চ তাপমাত্রার সাথে গহ্বরের প্রভাব), কম তাপমাত্রা নিউক্লিজ ক্রিয়াকলাপকে বাধা দিতে পারে এবং নিউক্লিক অ্যাসিড স্থিতিশীলতা রক্ষা করতে পারে।

3 .. সুবিধা এবং সতর্কতা
সুবিধা
 উচ্চ দক্ষতা: traditional তিহ্যবাহী পদ্ধতির চেয়ে দ্রুত (যেমন গ্রাইন্ডিং, বারবার হিমায়িত এবং গলানো, এনজাইমেটিক হাইড্রোলাইসিস) (সাধারণত কয়েক মিনিটের মধ্যে সম্পন্ন হয়) এবং আরও পুঙ্খানুপুঙ্খ বিঘ্ন;
 ইউনিভার্সিটি: বিভিন্ন ধরণের নমুনা প্রকারের (প্রাণী, উদ্ভিদ, অণুজীব ইত্যাদি) প্রযোজ্য;
Operate পরিচালনা করার জন্য সহজ: কোনও জটিল রিএজেন্টের প্রয়োজন হয় না, কেবল অতিস্বনক যন্ত্র এবং বেসিক সেন্ট্রিফিউগেশন সরঞ্জামের প্রয়োজন হয়।
সতর্কতা
 এভয়েড বুদবুদ: যদি নমুনায় প্রচুর পরিমাণে বুদবুদ থাকে তবে গহ্বরের প্রভাবের দক্ষতা হ্রাস পাবে এবং তদন্তটি অতিরিক্ত উত্তপ্ত হতে পারে। নিশ্চিত করুন যে তদন্তটি সম্পূর্ণরূপে তরলটিতে নিমগ্ন (তরল স্তরটি প্রায় 1-2 সেমি);
 নুক্লেজ ইনহিবিশন: বিঘ্নের পরে, লিসিস দ্রবণ (ইডিটিএ, ডিটারজেন্ট ইত্যাদি সহ) আন্তঃকোষীয় নিউক্লিজগুলিকে বাধা দেওয়ার জন্য সময়মতো যুক্ত করা উচিত (যেমন আরএনএএস যা সহজেই আরএনএকে হ্রাস করে);
 নমুনা ভলিউম: একক প্রসেসিং ভলিউম খুব বেশি বড় হওয়া উচিত নয় (সাধারণত ≤5ml), অন্যথায় অতিস্বনক শক্তি বিতরণ অসম হবে এবং বিঘ্নের প্রভাব ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হবে।

সংক্ষিপ্তসার
আল্ট্রাসাউন্ড দক্ষতার সাথে গহ্বরের প্রভাব এবং যান্ত্রিক কম্পনের মাধ্যমে কোষগুলিকে ব্যাহত করে, ডিএনএ/আরএনএ নিষ্কাশনের জন্য একটি মূল "রিলিজ পদক্ষেপ" সরবরাহ করে। মূলটি হ'ল নিউক্লিক অ্যাসিড অখণ্ডতার সুরক্ষা সর্বাধিক করার সময় কোষগুলিকে পুরোপুরি ব্যাহত করার জন্য শক্তি, সময় এবং তাপমাত্রা অনুকূল করা। এই প্রযুক্তিটি আণবিক জীববিজ্ঞান পরীক্ষাগুলির প্রাক প্রক্রিয়াকরণ পর্যায়ে (যেমন জিন ক্লোনিং, কিউপিসিআর, ট্রান্সক্রিপ্টম বিশ্লেষণ ইত্যাদি) ব্যাপকভাবে ব্যবহৃত হয় এবং নিউক্লিক অ্যাসিড নিষ্কাশনের জন্য একটি গুরুত্বপূর্ণ সরঞ্জাম।